PCR tajribalarida reagent uchishning batafsil tushuntirish

PCR tajribalarida reagent uchishning batafsil tushuntirish.

PRCR tajribasida reaktsiya tizimini qo'shgandan so'ng, biz qopqog'ini diqqat bilan qoplaymiz va qopqoq keskinlashuvni oldini olish uchun qopqoq yopiqligini takrorlaymiz. Ammo ba'zida biz ham shubhalanamiz: biz qopqoq mahkam yopilganligini tasdiqladik, ammo tajriba tugagandan so'ng regent hali ham bug'lanadi. Buning sababi nima?

Aslida, reagent aloqasi PCR tajribalaridagi eng keng tarqalgan muammolardan biridir va reagent aloqasini ta'sir qiladigan ko'plab omillar mavjud.

Bug'lanishning asosiy tajribasi davomida, reaktsiya eritmasi yuqori haroratda bug'lanadi, so'ngra shisha devor yoki plyonkaning havo tomchisining havo tomchisidan yoki plyonkaning havo bo'shlig'idan zımılılılığın, natijada reaktsiya eritmasining konsentratsiyasining o'zgarishiga qarab. O'zgarishlar, reaktsiya eritmasi miqdori kamaygan va ba'zilari hatto quruqlikka bug'lanib ketishgan, natijada nogiron tajribalar natijasida.

1. issiq qopqoqning bosimi, harorati

PCR tajribalarida biz reagent bug 'kondensatsiyasini oldini olish uchun qopqoqni qizdiramiz. Issiqlik qopqog'ining harorati odatda bug'ni kondensatsiyaning oldini olish uchun reaktsiya eritmasidan yuqori.

Termal tsiklni isitishning qopqog'i quyidagi to'rt turga bo'linishi mumkin: sozlanmaydigan isitish qopqog'ini, sozlanishi isitma qopqog'ini, moslashuvchan isitma qopqoqlari va avtomatik isitish qoplamlari. Sozlanishi qopqoqli barmoqli siqishni xususiyatlari. Agar mahkam siqilmasa, reaktivlar bug'lanadi. Eski bug'lanish qopqog'iga bosimni kuchaytirish orqali minimallashtirish mumkin. Ba'zida kechqurun naychani chimchilab, tugmachani burish mumkin. Oddiy sharoitlarda elektr aqlli isitish qoplami avtomatik ravishda sarf materiallari va doimiyligini oshirishi va qo'llanma aniqligini oshirib, eksperimental aniqlikni oshirishi va takroriy xatolarni kamaytiradi va eksperimental aniqlik va takrorlanishni kamaytiradi.

2. Kerakli materiallarning deformatsiyasi

Bug 'etishmovchiligi uchun ko'pchilik issiq qopqoqning bosimi etarli emas deb o'ylashadi. Issiq qopqoqning bosimi juda muhim, ammo bu faqat bitta jihati. Aslida, sarf materiallari ham juda muhimdir.

PRCRning yonma-yon plitalari odatda plastmassa materiallardan yasalgan, ular qizg'indan keyin sezilarli darajada kengayadi va deformat qiladi. PCR metall bazasining termal kengayish stavkasi plastinkaning plastinkasini juda past darajada joylashtirish juda past va PCR ning oralig'i plitasi termal kengayishidan keyin tekislik bilan birga bo'la olmaydi. Katta issiqlik qopqog'ini PCR yoki bosimning chekkalari natijasida hosil bo'lgan va PCRni aniqlash effektiga ta'sir ko'rsatadigan va PCRni aniqlash effektiga ta'sir ko'rsatadigan eng yuqori issiqlik qopqog'ini to'liq bog'lab bo'lmaydi.

3. Sarf materiallari muhrlanmagan

Termal qopqoqning qattiqligi va sarf materiallari PCR trubasi qopqog'i zich yopilganligini va PCR plitalarining sifati notekis ekanligini anglatmaydi. Yuqori sifatli sarf materiallari, ko'krak yuzasi va qopqoqning yuzasi silliq va quti qopqoq orqasidagi muhr yaxshi va oqish oson emas. Kameradir iste'mol materiallari, ular oqish yoki hatto quriydigan notekis nuqta va radial chiziqlar mavjud.

Shuning uchun, PCR tajribalarida yuqori sifatli va munosib iste'mol materiallarini tanlashga harakat qiling. Shu bilan birga, reaktsiyada tizimning bug'lanishining ta'sirini minimallashtirish uchun reaktsiya tizimini kengaytirish mumkin.