Hujayraning kriopreatruarriarori uchun asosiy maslahatlar

Hujayraning kriopreatruarriarori uchun asosiy maslahatlar

Oddiy o'sishni talab qiladigan normal o'sish faoliyati davomida hujayralar metabolizmini davom ettiradi. Harorat harorat pasayganda, himoyani to'xtatadi. Shuning uchun, juda past haroratli atrof-muhitda hujayralar ularning metabolik faoliyatini to'xtatishi va uzoq muddatli saqlash imkonini beradigan navbatdagi holatni kiritishi mumkin.

1. Eksperimental materiallar

Asosiy material:

Asosiy madaniyat o'rta

Zardob (an'anaviy FBS / NBS)

Ultrapure ishbilarmoni

Sterile DeTetil Sulqufid (DMSO)

Steril PB fosfat buferi tuzi

PUPTETING ASOSI

Elektr quvurli qurol

Tajribalarni tayyorlash

a) Muz bo'shlig'ini tayyorlash:

Umumiy hujayralar: 55% bazal o'rtacha + 40% belkum (FBS / Nbs) + 5% DMSO

Vital hujayralar: 90% Boovine zardobi (FBS / NBS) + 10% DMSO

Tayyorlangan kriopreot eritmasi 15 ml Centriftul 3 naychaga [uyasi] va keyinchalik foydalanish uchun 4 ° C-da saqlang.

b) muzlatilgan kameralarni tayyorlash:

Hujayralarni muzlatishdan oldin, yaxshi o'sish holatlari va logarifmik o'sish bosqichida klasellarni tanlang va hujayra holatini saqlab qolish uchun muzlashdan oldin ularni muzlatishdan oldin yangi o'rtada 12-24 soat bilan almashtiring.

2. Eksperimental protsedura

1. Muzlatilgan hujayralarning zichligiga e'tibor bering, bu taxminan 80% ~ 90%. Eski muhitni asorat qilish uchun Pipett qurolidan foydalaning, hujayralarni 1-2 marta yuvish uchun steril PBS qo'shing va madaniyat muhitida qolgan muhitni olib tashlang.

2. Tripsinni kameraga kiritish va ovqat hazm qilish uchun inkubatorga joylashtirish uchun tegishli miqdordagi tripsin yoki oshqozon sharbatini qo'shing. Mikroskop ostidagi hujayralarning holatiga e'tibor bering: sitoplazma tortib olinadi va hujayralar endi varaqlarga ulanmaydi. Hozirgi vaqtda ovqat hazm qilish jarayonini to'xtatish uchun to'xtash echimni qo'shing.

3. Hujayra bilan hujayralarni to'xtatib turish va 3-5 daqiqa davomida 1000 RPMda hujayralarni to'xtatib turish va kentraktni suspenziyani shakllantirish uchun mezbonlar bilan ohista puflab.

Jadratuvchini olib tashlang, tegishli miqdordagi muzlatgichli eritmani qo'shing va hujayralarni bir tekislash uchun muloyimlik bilan yozing. Yakuniy zichlikni 5 × 106 / ml ~ 1 ~ 107 / ml / ml ni tashkil qilish uchun kristalli muhit bilan hujayra zichligini rostlang.

4. Trogenik naychalarni kutilayotgan sig'imga qarab ajratish va avtomatik qopqoq mashinasidan foydalanish va muhrlash uchun avtomatik qopqoq mashinasidan foydalaning.

5. Oddiy kriopreaklash dasturi - bu -1 ° C uchun / 12 ° C gacha bo'lgan sovutish darajasi - asta-sekin quyidagi bosqichlarga qarab muzlatilishi mumkin: xona harorati: 4 ° C (20 min) → 20 ° C (30min) → -80 ° C C ° C (bir kechada) → Suyuq azotda uzoq muddatli saqlash.

Bundan tashqari, uni bir kechada -80 ° C dagi muzlatgichda saqlanishi mumkin va keyinchalik suyuq azotga o'tkazilishi mumkin.

Yongeye tibbiy - bu ilmiy-tadqiqot ishlarini ishlab chiqarish va biologiya iste'mol materiallarini ishlab chiqarish bo'yicha ixtisoslashgan yirik texnologiyali korxona. Pipett maslahatlari, pipetkalar, PCPLE, uyali madaniyat mahsulotlari va boshqa biologik mahsulotlar va boshqa biologik laboratoriya iste'mol materiallari. Yongeye Tibbiy tibbiy - bu sizning ishonchingiz va tanlovingizga munosib! Maslahatlash uchun xush kelibsiz!